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May 19, 2024

寄生虫とベクター 16 巻、記事番号: 299 (2023) この記事を引用

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2 オルトメトリック

メトリクスの詳細

バベシア属のアピコンプレックス寄生虫の 6 種、すなわち B. ミクロティ、B. ディバージェンス、B. ダンカニ、B. モタシ、B. クラッサ様、および B. ヴェナトルムは、風土病におけるヒトバベシア症の主な原因物質であると考えられています。地域。 これら 6 種は、主な宿主に対してさまざまな程度の毒性を持っています。 したがって、適切な治療戦略を採用するには、これらの種を正確に特定することが重要です。

私たちは、5 つのバベシア属の 18S リボソーム RNA 遺伝子をターゲットとするリアルタイム PCR-高分解能融解 (qPCR-HRM) アプローチを開発しました。 融解温度 (Tm) と遺伝子型信頼パーセンテージ値に基づきます。 次に、このアプローチは、ダニ刺咬歴のある患者から採取された 429 個の血液サンプル、プラスミドと混合された 120 個の DNA サンプル、および実験室で感染した動物サンプル 80 個を使用して評価されました。

提案された qPCR-HRM 法の感度と特異度はそれぞれ 95% と 100% で、検出限界はクローン化された標的遺伝子を含むプラスミドの 1 ~ 100 コピーでした。 検出レベルは分析したバベシアの種類によって異なりました。 この研究で設計されたプライマーは、私たちが提案した方法の高い種間特異性だけでなく、世界中の同じ種からの異なる分離株に対する高い汎用性も保証しました。 さらに、調製されたプラスミド標準から得られる Tm は、理論的には、5 つのバベシア種のすべての既知の配列の分離株を同定するのに適しています。

開発された検出方法は、ヒトバベシア症の疫学調査および輸血前スクリーニングに有用なツールを提供します。

バベシア科 (ピロプラスミダ目、アピコンプレックス門) [1] に属する血液原生動物であるバベシア種によって引き起こされるヒトのバベシア症は、再興しているダニ媒介性疾患です。 ヒトにおける輸血感染および自然感染によるバベシア感染症の症例は深刻な公衆衛生上の問題であり、近年世界中で頻繁に報告されています[2、3]。 ヒトのバベシア症の原因となる病原体は、主にダニ咬傷や輸血を介して伝染しますが、周産期経路や臓器移植を介して伝染することはほとんどありません[4、5、6、7、8]。 現在までに、100 種以上のバベシア種が世界中で確認されています [9]。

バベシア属以前は、野生動物と家畜にのみ感染すると考えられていました。 しかし、1957 年にユーゴスラビアでバベシアによるヒトへの最初の感染例が報告され [10]、この病気は徐々に世界的なヒトの新たな寄生虫病となり、免疫系が弱い人々にとっては健康を脅かす可能性があります。 6 つのバベシア種、すなわち B. microti、B. venatorum、B. divergens、B. duuncani、B. motasi、および B. crassa-like は、ヒトのバベシア症の原因となる主要な病原体としてよく知られています [11、12]。 米国におけるバベシア症例の大部分は、この病気が流行している地域では B. microti によって引き起こされますが、B. duncani および B. divergens も米国に分布しています [13]。 ヨーロッパでは、B. divergens は主にフランスとアイルランドで発見され [12、14]、B. venatorum はオーストリア、ドイツ、イタリア、スウェーデンで報告されています [14、15、16]、B. crassa 様感染症が報告されています。スロベニアとフランスでも[17、18]。 アジアでは、B. venatorum と B. crassa–like が主に中国で報告されています [19、20]。 しかし、B. microtiの症例は、ミャンマー国境沿いの中国南西部、台湾、日本でも報告されている[21、22、23、24、25]。 バベシア モタシ KO1 株 (DQ3466955) は韓国に分布しています [12、26]。 B. motasi KO1 および Babesia sp. の配列。 韓国の2人のヒト症例から分離されたKCDC-1 (MK930513) 株は、中国のB. motasi hebeiensis株の配列と非常に類似性を示した[26]。 米国ワシントン州で最初に報告された B. ダンカニが現在カナダで蔓延していることも観察されています [27、28、29]。

2 years [30, 31]. Thus, Babesia-infected patients who are asymptomatic may spread the pathogen to others via blood transfusion or organ transplantation [32]. In the USA, parasitic infections related to blood transfusions are almost entirely caused by Babesia [33]. It has also been observed that transfusion-transmitted babesiosis causes severe complications and death in approximately one of every five cases [30]. However, in human babesiosis-epidemic areas, blood screening for babesiosis is still lacking or only performed at a limited number of blood collection centers [34]./p> 0.25° C are considered to be indicative of different species [47]. The amplicons of B. duncani and B. motasi hebeiensis have the lowest and highest Tm, respectively, with a difference of about 1.7 °C. There was no overlap between the Tm range and melting curve characteristics of the five Babesia species, which could be accurately distinguished by HRM analysis. Considering the practicability of the qPCR-HRM in the diagnosis of babesiosis, the designed primers ensure high interspecific specificity of the method. Additionally, owing to the high homology existing between the different isolates, the Tm obtained from the prepared plasmid standard showed applicability for distinguishing all the known sequences of targeted species. These results lead to the conclusion that this method is highly versatile for different isolates of the same species worldwide. During the melting curve analysis, the GCP of the automatically invoked results was 90–100%, and the GCP provided strong support for the results of species discrimination./p>